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紫外可见分光光度计使用中常见问题解析
点击次数：1696 发布时间：2020-06-09
紫外可见分光光度计是分析测试实验室里常见的一种分析仪器，用于测定被测物质在一定波长照射下所产生的吸光度的大小，从而实现对物质进行定性或定量分析。在平时的日常教学及到企业调研时，发现在分光光度计使用问题上，使用者多多少少都存在一些疑惑或使用不规范的问题，下面就常见的一些问题进行讨论。
关于仪器的预热问题
(1)在一般分光光度计的使用说明书上，要求仪器预热时间约20分钟；若是带微处理器的分光光度计，开机后仪器自动进入自检(初始化)状态，约需1O分钟左右。在分光光度计预热这个环节上，很多使用者或多或少存在问题，如开机只预热电路系统(不调节波长、打开吸收池暗箱盖预热等)或认为初始化过程就是预热等等。
(2)对带微处理器有自检功能的分光光度计，开机后仪器自检(初始化)结束后，在测定窗口上，设置所需波长值，用一个吸收池装上纯净水置于光路上，调“0000A”后，预热仪器，当仪器显示读数不再变化后即可进行测定。
(3)对于紫外可见分光光度计，由于有双光源(钨灯与氘灯)，为了延长灯的使用寿命，开机自检完成后可以关掉测定时不用的光源灯。
关于波长准确度的检查与校正
(1)日常在使用分光光度计时，是否要经常进行仪器波长准确度的检查?答案是否定的。当在日常测定中发现仪器测定灵敏度下降，这时才应进行波长准确度的检查，简易的检查方法(粗检)是：仪器开机后，调节波长为580nm，在吸收池座的通光道中插入一张白色卡片纸，若能观察到一长方形的黄色光斑，说明波长准确度属正常范围，否则就应进行波长校正。
(2)当仪器经过长途搬运、受过机械振动或更换光源灯泡后，必须进行波长准确度的检查与校正。粗检同上，其校正方法有：干涉滤光片或镨钕滤光片校正法、利用氘灯的特征发射线校正法。具体步骤可参考仪器使用说明书。
关于吸收池的使用问题
按照吸收池使用的基本顺序分说如下：
(1)吸收池的润洗
吸收池装液前必须用待装溶液润洗2～3遍，润洗前是否要用纯水先润洗一遍呢?这可看具体情况区别对待。
如果初次用干的吸收池装待测液(特别是有色溶液)时，从维护保养吸收池的角度讲，为减小其干玻面对颜色的吸附能力，便于用后吸收池的清洗，建议先用纯水润洗一遍，再用待装溶液润洗2～3遍；若后再用此吸收池装浓度相近或更高浓度的溶液(如从小到大测定标准系列溶液的吸光度)时，可直接用待装溶液润洗2～3遍即可。
标准曲线法定量时，如果是先测定标准系列溶液的吸光度，当测到样品溶液时，由于测定的样品溶液浓度比后一个标准溶液的浓度低或不可知时，建议先用纯水润洗一遍，再用待装溶液润洗2～3遍。
(2)吸收池的装液、擦拭与放置吸收池润洗完成后注入待测溶液至池高的2/3~3/4处。
(3)吸收池成套性检验及处理新吸收池或吸收池使用一段时间后都必须进行成套性检验。
关于吸光度测定重复性的问题
分光光度计在测定过程中，发现同一个溶液在不同时问里其测定结果不同，即重复性不好，其原因是什么?排除测定错误因素外，可能原因有：
(1)仪器预热时间不够或预热方法不对所造成，应延长预热时间或采用正确的预热方法。
(2)光电转换器(如光电管)因长时间使用其光电转换效率发生了变化导致。这时标准溶液与待测溶液的吸光度都同样变低，在相对定量时对结果影响很小。但是对这类仪器，一般建议连续使用时间不应超过3h，若需长时间使用，间歇30min。
其他问题
(1)发现测定过程中的一些不良操作不利于仪器的维护、保养，使用者应尽可能避免。如在仪器的上方进行操作(如倒溶液)；拿出来的吸收池(或吸收池架)放在仪器的面板上；同实验室不同仪器的吸收池混用等。
(2)关于防尘、防潮问题
仪器一般都随机附有一只塑料布罩，不使用时用其罩住整个仪器，这是很好的防尘手段。但发现很多实验室里不用附来塑料布罩，而是自己用一块普通布或做成布罩来覆盖仪器，防尘效果不如塑料布罩理想。另外，在塑料布罩只放入数袋防潮硅胶，也能更好起到延长防潮的功效。在防潮时，如果仪器设有防潮干燥筒的，应经常检查，发现变色立即更换新的或加以烘干再用。
长期停用的分光光度计，要定期开机除潮，如每隔一个月通电预热半小时，以保持整机呈干燥状态，并且维持电子元件的性能。
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